摘要: 将蜡状芽孢杆菌CZ中的磷酸甘露糖异构酶基因（pmi）进行克隆,并在大肠杆菌中进行异源表达。将PCR扩增得到的pmi基因与p ET-22b（+）表达载体进行连接,转入大肠杆菌BL21（DE3）中,构建重组菌株BL21-p ET22b（+）-pmi,并成功表达了重组磷酸甘露糖异构酶。结果显示:克隆得到pmi基因序列全长为948 bp,编码315个氨基酸。通过镍柱His Trap HP亲和层析法纯化得到具有活性的重组酶,其蛋白分子大小约为40.8 ku。酶学性质结果显示:该酶的最适反应温度为35℃,在30⁴0℃酶活力相对稳定;最适p H为7.0,在弱碱性条件下保存12 h后仍存有50%以上酶活力;不同低浓度的金属离子Ni²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺、Cu²⁺和Mg²⁺均对该酶表现出不同程度的激活作用,其中Mn²⁺对该酶激活作用最显著,当其浓度为1 mmol/L时,激活作用最大,而Co²⁺对其有明显的抑制作用。