摘要: 利用兼并引物从西维因单克隆杂交瘤细胞的cDNA中克隆得到抗体基因的轻链可变区（VL）和重链可变区（VH）,长度分别为324bp和360bp,将其分别连接入pGEM-T-Easy载体进行测序;根据测序结果设计特异性引物和连接序列（Gly4Ser）3,利用重叠延伸PCR扩增得到长度为729bp的单链抗体基因片段（scFv）,亚克隆至原核表达载体pET30a（+）,并转化感受态细胞BL21（DE3）进行诱导表达;聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果显示,重组表达单链抗体形成包涵体,分子量大小约为33kDa,变性后利用不同条件进行复性,结果显示最佳复性时间为48h,最佳起始蛋白浓度为200μg/mL,含有精氨酸的复性液效果最佳;利用亲和层析纯化scFv,并利用竞争ELISA检测其活性,结果显示该scFv对西维因具有良好的亲和性和特异性。